美國NIGHTSEA專門致力于研究和開發熒光觀測裝備。NIGHTSEA熒光觀測利器包括:SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器,DFP-1雙熒光蛋白手電筒系列,BLS2單熒光蛋白手電筒系列等。
小巧簡便的熒光觀測裝置,應用如下:
一 美國NIGHTSEA熒光觀測利器的應用之——轉基因生物觀測:如小鼠幼崽,果蠅幼蟲,線蟲,斑馬魚,等等。
1. 觀測轉基因生物——果蠅
觀測轉基因生物——斑馬魚
3. 觀測轉基因生物——爪蟾
4. 觀測轉基因生物——線蟲
5.觀測轉基因生物——蠑螈
6.觀測轉基因生物——擬南芥種子
美國NIGHTSEA熒光觀測利器的應用之——樣本預篩選和輔助解剖
熒光是細胞生物學、神經生物學及其它多個研究領域中一種強大和廣泛使用的工具。nightsea的DFP-1, BLS2和SFA-RB可以用于樣本的預篩選、輔助解剖等,下面列舉幾個實例:
1. 熒光蛋白標記的工程病毒載體在神經元功能研究中應用十分廣泛,常通過顱內注射研究特定腦區的功能。在此中,常需要對病毒表達區域進行快速解剖用于特定的生化分析。為了提高快速解剖定位精準度,研究人員選用了nightsea的BLS2 Bluestar手電筒觀測系列,通過配合nightsea濾光眼鏡準確確定注射表達了熒光蛋白的伏核區(文獻– Xuan Li and Marina E. Wolf, 2011. Visualization of virus-infected brain regions using a GFP-illuminating flashlight enables accurate and rapid dissection for biochemical analysis. J. of Neuroscience Methods, Vol. 201, Issue 1, pp. 177-179. LINK)
EGFP標記的慢病毒質粒注射進小鼠大腦區域(Marina Wolf, Rosalind Franklin University)
2. 研究者從小鼠大腦中提取GFP標記的背紋體。這項困難的工作因有了NIGHTSEA的DFP-1或BLS2(手電筒和眼鏡組合),而變得簡單:很容易看到大腦中的目標區域,從而讓解剖更準確、。
小鼠大腦中GFP標記的背紋體(Charles Mazel. Sample photographed at laboratory of Stefano Vicini, Georgetown University)
3. 用DFP-1雙熒光蛋白手電筒,BLS2單熒光蛋白手電筒,或SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器,可以很快的檢測樣本是否成功染色(Alexa Fluor 488 Phalloidin標記),如下圖:
兔腰肌的肌纖維(用Alexa Fluor 488 Phalloidin標記)
左圖:白光觀測 右圖:Royal Blue熒光觀測(Motic SMZ-186體視顯微鏡觀測)
4.用SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器以斑馬魚為模型,觀測不同有害化學物(醫藥、農藥、食品添加劑等)對大腦發育的影響。觀測圖片如下:
基因斑馬魚大腦共聚焦圖像
Kaede protein–綠色是未改變的,紅色是發生改變的,圖片由Robert Thorn(Creton Lab, 布朗大學)提供
5. 熒光是珊瑚采集研究的重要工具。現在,可以用經濟又實惠的SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器安裝到體視顯微鏡上檢測珊瑚。
下面的圖片是通過立體顯微鏡觀看珊瑚蟲,由UNCW威爾明頓納大學Alina Szmant 博士與NIGHTSEA Charles Mazel博士提供
6. 用于結核分枝桿菌重組株的篩選
在結核分枝桿菌中成功構建了高效同源重組系統,利用該系統構建了rv1364c、pstP跨膜區、pstP胞外區三個突變株,得到雙交換突變株的效率為25%-62.5%,從雙交換突變株得到無痕缺失突變株的效率為100%。通過gfp作為熒光標記基因,利用NightSea BlueStar藍光手電筒和濾光眼鏡,可以對平板上的基因缺失株直接進行快速判定。
本研究采用nightsea BLS2 BlueStar 藍色手電筒和濾光鏡對平板上的結核分枝桿菌綠色熒光蛋白菌落進行快速鑒定。該方法可以從幾百個菌落中瞬間鎖定陽性克隆。平板上的菌落照片拍攝用單反相機加載購自nightsea公司的濾光片實現。
圖片源自[結核分枝桿菌同源重組基因敲除系統的構建和應用]
Good News標準的DFP-1雙熒光蛋白觀測鏡,只有RB-Royal Blue和GR-Green兩種熒光激發裝置,也就是說標準的DFP-1只能用于觀測綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白。
現在,您可以選擇以下任何兩種熒光裝置,組裝成您專屬的雙熒光蛋白手電筒啦。
熒光裝置型號 | Excitation激發光 | Emission發射光 | 可觀測熒光 |
RB-Royal Blue | 440-460nm | 500nm LP | GFP, eGFP, fluorescein.... |
CY-Cyan | 490-515nm | 550nm LP | YFP, Venus, Lucifer Yellow... |
GR-Green | 510-540nm | 600nm LP | DsRed, dTomato... |
VI-Violet | 400-415nm | 460nm LP | CFP, BFP... |
UV-Ultra Violet | 360-380nm | 415nm LP | DAPI |
注:
1.RB-Royal Blue用于觀測綠色熒光蛋白
GFP:綠色熒光;EGFP:增強型綠色熒光;fluorescein熒光素
2.CY-Cyan用于觀測黃色熒光蛋白
YFP:黃色熒光蛋白;Venus:金色;Lucifer Yellow:熒光黃
3.GR-Green用于觀測紅色熒光蛋白
DsRed:紅色熒光蛋白;dTomato:番茄紅
4.VI-Violet用于觀測紫色熒光蛋白
CFP:青色熒光蛋白;BFP:堿性胎兒蛋白
5.UV-Ultra Violet用于觀測紫外光
DAPI:藍色熒光